Experimentación

La CE modifica la normativa sobre químicos para reducir pruebas en animales.

2009-07-25T04:51:00.000-07:00

Bruselas, 23 jul (EFECOM).- La Comisión Europea (CE) ha introducido hoy varias modificaciones en la normativa comunitaria sobre sustancias químicas con vistas a reducir el número de animales empleados para probar este tipo de productos.
La enmienda, aprobada hoy por el Ejecutivo comunitario, incluye cuatro métodos alternativos a la experimentación con animales y revisa otros dos ya contemplados dentro de REACH, el reglamento europeo para el registro, evaluación, autorización y restricción de sustancias químicas, según informó la CE en un comunicado.
Las modificaciones afectarán a la legislación sobre cosméticos, detergentes, biocidas y otros productos probados en animales.
Entre los nuevos sistemas, se incluye un método in vitro que reducirá el número de animales empleados para testar la irritación cutánea que provocan ciertas sustancias, pruebas que normalmente se llevan a cabo sobre conejos.
En las pruebas convencionales se utilizan hasta tres conejos por cada producto químico, según la Comisión
Esta enmienda es la primera introducida en el reglamento europeo sobre pruebas químicas, que fue adoptado en mayo de 2008, y refleja "el compromiso de la CE para acelerar la disponibilidad de métodos de prueba alternativos", afirmó la CE.
El reglamento comunitario sobre productos químicos fija estándares para determinar si ciertas sustancias son peligrosas para la salud humana y para el medio ambiente. EFECOM

http://www.invertia.com/noticias/noticia.asp?subclasid=&clasid=&idNoticia=2187305

Frustrante texto sobre la experimentación animal aprobado en la Unión Europea.

2009-05-10T02:45:00.000-07:00

Resolución legislativa del Parlamento Europeo, de 5 de mayo de 2009, sobre la propuesta de Directiva del Parlamento Europeo y del Consejo relativa a la protección de los animales utilizados para fines científicos (COM(2008)0543 – C6-0391/2008 – 2008/0211(COD)).

http://www.europarl.europa.eu/sides/getDoc.do?type=TA&reference=P6-TA-2009-0343&language=ES&ring=A6-2009-0240

"Sólo cuatro eurodiputados españoles votaron a favor de reducir los experimentos con primates en los laboratorios durante la votación celebrada ayer en el Parlamento Europeo.
Concretamente, sólo Raül Romeva (ICV), Ortuondo Larrea (PNV), Miguel Irujo (EA) y el eurodiputado de Los Verdes David Hammerstein votaron en contra de la enmienda presentada por el conservador inglés Neil Parish, que pedía que no se limitara el uso de simios a los ensayos de investigación de enfermedades mortales o discapacitantes .
En opinión de Alberto Díez, director de Campañas de la Asociación Nacional para la Defensa de los Animales (ANDA), con la negativa de ayer “se ha perdido una oportunidad histórica para controlar una práctica tan sensible entre los ciudadanos como el uso de primates en experimentación”.
Asimismo, el Parlamento tampoco se mostró a favor de restringir el uso de primates sólo a los que hayan sido criados para ese fin y acabar con la captura de ejemplares libres en las selvas.
Por otra parte, según ha explicado Díez, además de los cuatros europarlamentarios ya citados, sólo tres más (los populares Pilar del Castillo y Alejo Vidal-Quadras y del PSC, Raimon Obiols) votaron para eliminar las pruebas que causen un sufrimiento severo y prolongado a los animales.
“Nos resulta alarmante el escaso apoyo que los representantes españoles han otorgado a estos dos aspectos claves sobre el uso de animales en los laboratorios”, ha indicado el responsable de ANDA. Sin embargo, no niega que la reforma de la Directiva sobre experimentación supone “un primer paso” para reducir el número de animales que mueren en los laboratorios europeos (unos doce millones cada año) y potenciar el desarrollo de métodos alternativos."

Acuerdo internacional sobre alternativas a ensayos científicos con animales.

2009-04-27T10:00:00.001-07:00

Los esfuerzos que se realizan a nivel mundial para promover alternativas a los ensayos con animales han recibido un fuerte impulso con la firma de un acuerdo de cooperación entre una serie de organismos internacionales, entre los que se incluye el Centro Común de Investigación (CCI) de la Comisión Europea, encargados de validar esos métodos de ensayo alternativos.
El Centro Europeo para la Validación de Métodos Alternativos (CEVMA), que forma parte del Centro Común de Investigación (CCI) de la Comisión Europea, y sus homólogos en los Estados Unidos (ICCVAM), Japón (JACVAM) y Canadá (Environmental Health Science and Research Bureau) han firmado un acuerdo de cooperación que va a dar nuevo impulso a la expansión por todo el mundo de alternativas científicamente probadas a los métodos de ensayo con animales.
La cooperación científica a nivel internacional tiene como principales objetivos la reducción del número de ensayos con animales, tanto para garantizar su bienestar como por cuestiones éticas, y la protección la seguridad de los consumidores.
El acuerdo prevé una cooperación y una coordinación reforzadas a escala internacional sobre la evaluación y validación científicas de métodos de ensayo de toxicidad in vitro. Esa intensificación de la colaboración entre los firmantes hará que los métodos alternativos sean reproducibles, tengan un fundamento científico sólido y permitan identificar con precisión los peligros para la salud. Todo ello, por su parte, debería facilitar la adopción de métodos de ensayo ampliamente aceptados por los órganos reguladores de la Unión Europea, los Estados Unidos, Japón, Canadá y otros organismos internacionales, como la OCDE, por ejemplo.
Se espera que, gracias a este acuerdo, los métodos de ensayo que sean validados científicamente tengan más credibilidad y puedan ser aplicados más rápidamente por los investigadores.
La colaboración reforzada entre los firmantes formalizará el modo en que ya trabajan juntos en la evaluación de métodos de ensayo y la realización de estudios de validación, de evaluaciones científicas independientes por homólogos y de recomendaciones de las autoridades reguladoras. Las organizaciones trabajarán juntas también en la elaboración de recomendaciones armonizadas sobre cuestiones de regulación y en el desarrollo de mecanismos de evaluación por pares.
Contexto
Cada año se utilizan alrededor de 12 millones de animales en la UE en ensayos de seguridad o investigación biomédica. El objetivo de la UE es reducir el número de animales utilizados y perfeccionar los métodos de ensayo para que les causen el menor daño posible. Por ello, a finales de 2008 la Comisión Europea lanzó una propuesta para reforzar la protección de los animales que siguen utilizándose en procedimientos científicos, garantizar unas condiciones equitativas para la industria de la UE y aumentar la calidad de la investigación en la Unión. Con ello se pretendía reducir al mínimo el número de animales utilizados en experimentos.
El Centro Europeo para la Validación de Métodos Alternativos (CEVMA), que forma parte del Centro Común de Investigación de la Comisión Europea, se creó en 1992 en respuesta a la Directiva 86/609/CEE sobre la protección de los animales utilizados para experimentación y otros fines científicos. Esa Directiva exige a los Estados miembros y a la Comisión que apoyen activamente el desarrollo, validación y aceptación de métodos que puedan reducir, mejorar o sustituir la utilización de animales de laboratorio. Establece, asimismo, que «no deberá realizarse un experimento si se dispone de otro método científicamente satisfactorio, razonable y factible para obtener el resultado perseguido, y que no implique la utilización de un animal».
El CEVMA coordina la validación de métodos de ensayo alternativos a nivel europeo y actúa como centro de intercambio de información sobre la elaboración de tales métodos.

http://euroalert.net/news.aspx?idn=8694

Y Zapatero mientras tanto se dedica a inaugurar centros de tortura animal:

Erase una vez un gobierno que se subió al vagón de cola del tren de la innovación.

2009-04-25T10:03:00.000-07:00

Durante las últimas décadas los "grandes investigadores" que la especie humana ha gestado, parido y alimentado, grandes sabios todos ellos, han desarrollado inteligentísimos métodos de experimentación que aunque a lo largo de todo este tiempo hayan tenido en un sinvivir a sus teóricos beneficiarios, los ciudadanos, con constantes y fatales errores en la comercialización mundial de las sustancias químicas que han producido, todavía siguen siendo "insustituibles" según argumentan Hertzfeld y Myers para justificar la oposición de la FDA a la legislación contra la prueba Draize de toxicidad por su insuficiencia y la certeza de otros métodos alternativos:

"... Si todos los ensayos o pruebas se convirtieran en ensayos in vitro, entonces muchas firmas ahora enfrascadas en la experimentación con animales encontrarían que sus laboratorios serían practicamente inútiles.. El statu quo es un poderoso motivador para esas firmas que por ahora son muy rentables. Las autoridades regulatorias tienden a seguir, no a dirigir hacia la incorporación de las nuevas tecnologías, y ellos están en su lugar, influidos fuertemente por intereses industriales."

http://www.universoanimal.com/problemas_con_modelos_animales.pdf

Veamos en que consisten los protócolos de toxicidad a los que tan "apegados" se encuentran:

PRINCIPIOS DE TOXICOLOGIA
INTRODUCCION
Los estudios de toxicidad constituyen hoy día una parte muy importante dentro del desarrollo de un nuevo fármaco y se extienden prácticamente a lo largo de todo el mismo. El objetivo de los mismos es "evaluar el riesgo o peligro potencial que un agente químico o físico puede ocasionar sobre la salud humana cuando es objeto de exposiciones agudas o crónicas".
Y no se limitan sólo a los fármacos sino que la mayor parte de las sustancias químicas industriales (pesticidas, agroquímicos, cosméticos, plásticos, etc.) son objeto de estudios de toxicidad iguales o más complejos que los realizados con los nuevos fármacos.
Podría definirse la toxicidad como "el estudio cualitativo y cuantitativo de los efectos deletéreos ocasionados por agentes químicos o físicos sobre la estructura y función de los sistemas vivos y la aplicación de estos estudios para la evaluación de la seguridad y la prevención de daños al hombre y a las formas de vida útiles" (Hayes, 1975) El término cualitativo se refiere al tipo de órgano diana afectado, en comparación con otras sustancias conocidas, mientras que el término cuantitativo se refiere a la relación dosis-respuesta.
En este sentido, muchas veces es difícil separar efecto tóxico de efecto farmacológico. Ya en el siglo XVI, Paracelso afirmaba que "todas las sustancias son tóxicas y ninguna sustancia es tóxica. Sólo la dosis determina la toxicidad". Cuando se representa gráficamente, la curva dosis respuesta para un efecto en particular (efecto hepatotóxico, nefrotóxico, mutagénico, embriotróxico, etc.) presenta una forma sigmoidal, siendo de particular interés examinar:
La forma de la curva dosis respuesta
Las respuestas a dosis bajas del agente
La naturaleza de las respuestas a dosis altas
La pendiente de la parte recta de la curva (acentuada = alta toxicidad; reducida = baja toxicidad)
Sin embargo, normalmente las cosas no son tan sencillas y para cada parámetro examinado se obtiene una curva dosis respuesta de diferente configuración y, para complicar más las cosas, alguna puede ser superponible a las curvas dosis-respuesta farmacológica.
Un ejemplo característico es el constituido por los anestésicos locales tipo amida. Estos compuestos actúan sobre el canal de sodio de las células nerviosas, impidiendo la despolarización de la membrana y, por lo tanto, la transmisión del impulso nervioso. Sin embargo, este efecto no se produce sólo en los nervios periféricos y, a dosis elevadas se observan, ataxia y parada cardíaca, efectos todos ellos derivados del bloqueo de los canales del sodio en el sistema nervioso central y en el marcapasos cardíaco. Si no se aprecia ningún otro órgano diana ¿puede hablarse de un efecto tóxico o habría que hablar mejor de un efecto farmacológico "sobredimensionado"?
En cualquier caso, los estudios de toxicidad están diseñados para obtener la mayor información posible sobre los efectos adversos que pueden tener lugar bajo exposiciones normales o accidentales.
COMO SE LLEVAN A CABO
Independientemente de las directrices de las agencias para proteger el ser humano, se dispone de dos vías para evaluar la posible toxicidad o efectos adversos de un fármaco.
La primera de ellas se refiere al uso de animales de especies adecuadas para determinar los efectos adversos en condiciones controladas. Las desventajas de estos estudios son dobles:
a veces es difícil extrapolar de los animales al hombre (recuérdese el caso de la talidomida no presenta efectos dismorfogénicos en la rata, aunque sí en el ratón, el conejo y el mono).
Es difícil extrapolar resultados a partir de las altas dosis necesarias en los animales para obtener algún efecto en comparación con las dosis mucho más bajas utilizadas en el hombre.
La segunda vía se refiere a estudios epidemiológicos retrospectivos, que también tienen desventajas, sobre todo porque el efecto adverso ha tenido que ocurrir como consecuencia de la exposición, porque tiene que ser significativo para poder ser detectado en un número limitado de individuos y porque puede ser difícil establecer una clara prueba de causalidad.
CONSIDERACIONES FUNDAMENTALES
LAS PRUEBAS
En general, para un fármaco a administrar de forma crónica y por vía oral (por ejemplo un antidiabético oral o un antihipertensivo) son preceptivas las pruebas siguientes:
Toxicidad aguda (por dos vías de administración y al menos en dos especies animales)
Toxicidad subaguda (dos especies animales, vía de administración considerada en humanos, 2 a 4 semanas)
Toxicidad subcrónica (dos especies animales, vía de administración considerada en humanos, 13 semanas, 1 semana de recuperación)
Toxicocinética (una o dos especies. 2 a 4 semanas)
Toxicidad crónica (dos especies animales, vía de administración considerada en humanos, entre 6 meses y 1 año, 4 semanas de recuperación)
Carcinogénesis (dos especies animales -rata y ratón, via de administración oral en el pienso, entre 18 meses y 2 años)
Teratogenia (dos especies animales -rata y conejo -, vía de administración considerada en humanos, administración del fármaco durante la gestación)
Fertilidad (una especie animal -rata-, machos y hembras, administración antes y después del apareamiento)
Toxicidad peri - y post-natal
Mutagenesis: test de sistemas bacterianos con o sin activación microsomal
Hay que añadir los estudios previos (dose-response finding studies) para determinar las dosis, en particular al inicio de los estudios de toxicidad subaguda, cuando se añade el fármaco a la dieta, estudios de teratogenia y fertilidad y algunos de los tests mutagénicos.
Adicionalmente, según el tipo de fármaco, pueden ser necesarios algunos test adicionales como son:
- Toxicidad por inhalación (p. Ejemplo para un fármaco a administrar vía aerosol)
- Irritación ocular
- Irritación dermal
- Irritación intravenosa, intraarterial o perivenosa
- Fototoxicidad, etc.
Las vacunas, los productos derivados de biotecnología, los fármacos anticancerosos, los productos para la terapia génica, etc., requieren estudios toxicológicos independientes, especialmente diseñados para ellos
La mayor parte de las veces, estos estudios se realizan en Centros especializados de Investigación por Contrato (CROs). En efecto, sólo las grandes multinacionales farmacéuticas realizan un número suficiente de estudios como para justificar las importantes inversiones, tanto humanas como materiales y tecnológicas, necesarias para poder llevar a cabo los estudios toxicológicos de acuerdo con la normativa de las agencias. La mayor parte de la Industria realiza en sus instalaciones algunos de los tests más sencillos (toxicidad aguda, mutagénesis, etc) recurriendo a las CROs para los estudios más complejos.
La complejidad que entraña un estudio de toxicidad queda de manifiesto si se consideran los siguientes puntos:
1. El estudio debe llevarse a cabo según las buenas prácticas de laboratorio (ó GLPS de "Good Laboratory Practices"), lo que quiere decir que deben estar implementados procedimientos normalizados de trabajo para todas y cada una de las manipulaciones efectuadas. Debe existir un departamento de Garantía de Calidad que certifique que se cumplen todos los PNTs.
2. La participación multidisciplinaria de profesionales: se requieren veterinarios, farmaceúticos, químicos analícos, anatomopatólogos, etc.
3. La exigencia de unas condiciones ambientales muy especiales para garantizar la no interferencia de factores ajenos a la sustancia ensayada. Los animales suelen estar libres de patógenos específicos y deben ser estabulados en recintos protegidos, en condiciones de temperatura y humedad controlados, y con aire filtrado a través de HELA. El alimento y el agua deben ser estériles y el personal que se ocupa de la limpieza y del tratamiento de los animales debe ir provisto de trajes especiales para evitar la contaminación.
4. El elevado número de animales necesario para cada estudio, que aumenta proporcionalmente con la duración del mismo para garantizar un número suficiente de supervivientes al final del mismo.
5. El tiempo requerido para la realización de las pruebas de laboratorio o las autopsias obliga a una producción "en cadena"
6. Es importante el disponer de una estadística propia de cada centro sobre longevidad de animales y porcentaje de supervivientes en los ensayos de larga duración. Esto permite establecer sí un estudio determinado muestra un comportamiento dudoso o, en caso contrario, validarlo.

TOXICIDAD AGUDA
La toxicidad aguda tiene por objeto determinar los efectos de una dosis única y muy elevada de una sustancia. Usualmente, el punto final del estudio es la muerte del animal y la toxicidad aguda se expresa por la dosis letal 50, que viene a representar más o menos la dosis de la sustancia que produce la muerte en el 50% de los animales.
La observación de los animales se lleva a cabo después de la administración de la sustancia y dura hasta 14 días, después de los cuales los animales son sacrificados y autopsiados. En general, el test se realiza con 5 grupos de 10 animales de cada sexo, aunque existen algunos métodos abreviados que intentan reducir el número de animales a sacrificar.
La determinación de la DL50 se suele llevar a cabo en rata y ratón por al menos dos vías de administración entre las cinco posibles (i.v., i.m. ip. s.c. y oral). En el perro y otros animales de tamaño parecido, el punto final del estudio no suele ser la muerte del animal, sino la determinación de la dosis que produce unos severos efectos adversos
TOXICIDAD SUBAGUDA
En estos tests, la administración del fármaco se lleva a cabo diariamente durante periodos que oscilan entre 15 días y 4 semanas. Las principales Administraciones Sanitarias requieren, antes de autorizar la administración de una dosis única de la sustancia al ser humano, que se hayan realizado estudios de toxicidad subaguda en dos especies animales, una de las cuales deberá ser no roedora. En ambas especies, se suelen utilizar entre 4 y 5 dosis de sustancia (vehículo, dosis baja, media - dosis alta o vehículo - dosis baja -dosis media baja - dosis media alta - dosis alta).
En la rata se requieren al menos 10 animales de cada sexo para cada dosis y en el perro, al menos 4 animales de cada sexo. Muy frecuentemente, se añaden dos grupos satélite de animales (uno tratado con vehículo y otro con la dosis más alta) que no son sacrificados al final del estudio, sino que se les deja una o dos semanas para recuperarse las posibles lesiones inducidas por el producto.
Durante el estudio se controlan diariamente un buen número de parámetros (aspecto, comportamiento, peso, consumo de agua y alimento, ECG, examen oftalmoscópico, etc) y al final los animales son sacrificados y autopsiados. Al inicio del estudio y antes de la autopsia, se toman muestras de sangre y orina para ser analizadas. La autopsia consiste en el examen macroscópico de las vísceras y tejidos y en la toma de especímenes para su examen anatomopatológico.
ESTUDIOS DE TOXICIDAD SUBCRONICA Y CRONICA
Básicamente, estos estudios tienen características similares a los anteriores en cuanto al número de animales, número de dosis, observaciones, etc. Los estudios de toxicidad subcrónica suelen durar 3 meses, mientras que los de toxicidad crónica suelen durar 6 meses o un año, según el uso terapeútico que vaya a tener la sustancia.
Si, por ejemplo, la sustancia es un antihipertensivo o antidiabético oral, cuya administración en el hombre se prevé dure años, la toxicidad crónica durará un año.
En el caso de un antibiótico, usado en el hombre durante periodos de 8-10 días, bastará con estudios de 6 meses.
Es importante decidir la forma de administrar la sustancia a los animales durante estos períodos tan largos. Si la administración con una sonda gástrica no suele ocasionar problemas en tratamientos cortos, el estrés o la posibilidad de accidentes con el sondaje deben ser considerados frente a la mayor imprecisión y otros problemas que conlleva el administrar el fármaco mezclado con el alimento (rechazo del alimento, dilución de la dosis en el tiempo, absorción diferente, etc.)
Las Administraciones exigen al menos dos especies animales, una de las cuales deberá ser no-roedor para los estudios de toxicidad subcrónica y crónica.
ESTUDIOS DE CANCEROGENESIS
Tienen por objeto determinar si la exposición prolongada a la sustancia tiene un efecto promotor de tumores por afectar factores de crecimiento o activar oncogenes. Las Administraciones exigen que estos tests de realicen en dos especies animales, generalmente ratas y ratones con una duración que oscila entre 18 meses (para el ratón) y 24 meses. Como en estos estudios, la cinética de la absorción del producto es menos importante, este se suele dar mezclado en la dieta
ESTUDIOS DE TOXICOCINETICA
Tienen por objeto determinar si la cinética del producto se modifica bien por la dosis, bien la exposición repetida (por ejemplo puede haber una inducción de enzimas hepáticos que acelere la biotransformación, o por el contrario, puede producirse una saturación hepática que incremente los niveles plasmáticos de forma anormal. Estos estudios se suelen realizar en conjunción con los estudios de toxicidad subaguda y consisten en determinar los perfiles farmacocinéticos de la sustancia en sangre después de diferentes dosis el primer día de tratamiento y al final del estudio. La comparación de las curvas de niveles plasmáticos y de las áreas bajo la curva, permite obtener interesantes conclusiones sobre el metabolismo del producto en función de la dosis y del tiempo de tratamiento.
MUTAGENESIS
Existe un gran número de test desarrollados para determinar el potencial mutagénico de una sustancia. Sin embargo, las Administraciones exigen un "panel mutagénico" consistente en tres ensayos "in vitro" y un ensayo "in vivo" En los ensayos "in vitro" se utilizan células bacterianas (Salmonella typhimorium ) o de mamífero (CHO o linfocitos humanos) que se incuban con concentraciones crecientes del producto a ensayar en presencia o ausencia de la llamada fracción S-9 (esta fracción consiste en una suspensión de microsomas hepáticos de rata que se añade para favorecer la posibilidad de que un producto, que no sea en principio mutagénico, experimente una metabolización a un producto que sí lo sea) En los ensayos "in vivo" se observan posibles defectos durante la hematopoyesis en el ratón (test del micronúcleo)
ESTUDIOS SOBRE LA REPRODUCCION
Se ha diseñado una batería de ensayos sobre los diferentes "segmentos" del ciclo reproductivo
Segmento I o Estudios de Fertilidad: Se suelen realizar en la rata y el tratamiento con el producto se extiende desde los 60 días antes del apareamiento en el macho y los 15 días antes del apareamiento en la hembras, hasta el destete de la prole.
En los estudios de teratogenia (segmento II) la administración de la sustancia tiene lugar desde los días 8 a a 21 del embarazo, es decir desde el momento de la implantación del óvulo hasta el parto. Usualmente, se llevan a cabo estos estudios en ratas y conejos.
Finalmente, los estudios de toxicidad peri- y post-natal tienen por objeto determinar posibles efectos sobre el desarrollo de los embriones, el parto y la lactancia. (segmento III).
En algunos casos determinados, los estudios de toxicidad peri- y post-natal se extienden a varias generaciones, es decir, las hembras F0 procedentes de un primer estudio, una vez en edad de procrear son tratadas desde el día 8 de la gestación hasta el destete, observándose los efectos posibles sobre la generación F1.
Algunos estudios muy especiales (para el caso de productos hormonales y similares) se han desarrollado para determinar efectos específicos sobre la gametogénesis, pre-implantación e implantación.
Todos los datos relativos a estos estudios (cuadernos de laboratorio, diskettes de ordenador, registros de aparatos, etc.) así como las muestras de tejidos en formol y las preparaciones microscópicas, deben conservarse un mínimo de 10 años.
CONSIDERACIONES GENERALES
EL FARMACO
Antes de iniciar los estudios de toxicidad, el toxicólogo debe tener un amplio conocimiento de las propiedades físico-químicas del compuesto
- Solubilidad: muchos compuestos son tan insolubles que no pueden alcanzarse concentraciones tóxicas si se administran i.v., i.p., s.c., o en suspensión acuosa. En estos casos hay que preparar emulsiones o disoluciones en agentes orgánicos inertes que pueden limitar su administración a la vía oral o intraperitoneal.
- La estabilidad química del fármaco en disolución o suspensión debe ser conocida ya que productos de degradación pueden interferir con los ensayos o ser confundidos con los metabolitos. -
- Analítica: Deben conocerse métodos analíticos específicos y sensibles del producto y de sus productos de metabolización en fluidos y tejidos orgánicos.
EL VEHICULO
Una limitada solubilidad del fármaco puede obligar a considerar emulsiones o soluciones en aceites vegetales para conseguir administrar dosis capaces de mostrar efectos tóxicos. Sin embargo, el empleo de estos solventes crea diversos problemas como son:
- una mayor absorción del agente en el tracto digestivo, con una mayor toxicidad sobre los órganos diana.
- Una retención del agente en el vehículo que permanece en el tracto digestivo -
- La farmacocinética de un agente poco soluble puede cambiar de forma dramática según el disolvente utilizado (polisorbatos, aceites vegetales, alcohol, etc.)
- La absorción transdérmica de algunos fármacos (y por tanto su toxicidad o efectos adversos) depende en gran medida de la formulación empleada y del uso o no de sustancias que favorecen la absorción transcutánea
- Puede haber interacciones metabólicas entre el vehículo y la sustancia. Por ejemplo, cuando se administró DDT en aceite de maíz, se observaron grandes inclusiones de lípidos en los hepatocitos de los animales, lo que sugiere una dificultad en la asimilación de este aceite. En cambio, la administración en aceite de cacahuete no provocó estas inclusiones aunque las concentraciones tisulares del insecticida fue similar en ambos casos.
LA VIA DE ADMINISTRACION
La vía de administración será la vía anticipada para el ser humano. Por ejemplo, si se anticipa que la vía oral será la empleada en el hombre, todos los estudios se llevarán a cabo por esta vía, si bien los estudios de toxicidad aguda se podrán llevar también a cabo por vía parenteral (intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, etc)
Cuando el fármaco se puede administrar en el hombre por varías vías (por ejemplo, un agonista beta como el salbutamol que se puede administrar i.v., oral o por inhalación), se deben hacer estudios por las tres vías de administración al menos de toxicidad subaguda (hasta 4 semanas)
Estudios de más de 4 semanas por vías que no sean la oral son poco prácticos por la dificultad que entraña el tratamiento diario, el estrés al que son sometidos los animales y la probabilidad de que se produzca algún accidente que ocasione la muerte de algún animal.
Si fuera imprescindible una administración parenteral, se deberán implantar de forma crónica, catéteres adecuados que eviten posibles y repetidos traumas. En los estudios a largo plazo (toxicidad crónica y carcinogénesis) el fármaco se administra de la forma menos traumática posible (en una cápsula de gelatina en el perro, o mezclado con el alimento en la rata y el ratón)
En algunos casos, la forma de la administración puede ser muy importante: Por ejemplo, en el estudio de toxicidad subaguda del producto IQB-9302, un anestésico local similar a la bupivacaina, se observó una diferencia muy notable en los efectos adversos si la inyección i.v. se practicaba en un bolo en 30 segundos o lentamente mediante una infusión i.v. en 5 minutos. De igual forma, hay que tener en cuenta que no es lo mismo una dosis oral administrada por intubación que la misma dosis (en mg/kg de animal) administrada en el pienso.
LAS DOSIS
La elección de las dosis es de gran importancia para poder finalizar con éxito un estudio de toxicidad. Normalmente, antes de iniciar un nuevo estudio, se lleva a cabo un estudio preliminar (el llamado estudio de búsqueda del intervalo de la dosis - "Dose-range finding study") que se hace en un número limitado de animales (por ejemplo, un perro de cada sexo o 10 ratas de cada sexo) para determinar las dosis.
Este estudio preliminar debe tener una duración suficientemente larga como para que se alcance una situación estable. Las regulaciones exigen que se establezca la dosis sin efectos tóxicos detectables (NOAEL), la menor dosis en la que aparecen efectos adversos relacionados con la administración del fármaco (LOAEL) y una dosis tóxica que ocasione efectos graves pero sin producir más que una reducida mortalidad de los animales (debe haber un número de animales supervivientes lo suficientemente amplio como para que los exámenes anatomopatológicos y bioquímicos revelen diferencias significativas en relación con los animales de control).
En general, se utilizan entre 4 y 5 dosificaciones distribuidas de la siguiente forma:
- Grupo de control (tratado con el vehículo)
-Grupo de dosis bajas (no deben observarse efectos adversos significativos durante el estudio y en la autopsia no deben encontrarse alteraciones sanguíneas, bioquímicas o anatomopatológicas de interés
- Grupo de dosis media baja -
- Grupo de dosis media alta. En ambos casos deben aparecer efectos adversos o cambios en los parámetros clínicos durante el tratamiento, y cambios significativos en alguno de los parámetros examinados en las autopsias
- Grupos de dosis alta. Los cambios clínicos o efectos secundarios observados durante el tratamiento deben ser importantes. Puede producirse alguna muerte, pero el número de supervivientes debe permitir comparaciones estadísticas
En todos los estudios con dosis repetidas (toxicidad subaguda, subcrónica y crónica) se añaden grupos satélites (normalmente a los grupos control y de dosis más altas) para determinar la reversibilidad de los efectos tóxicos. Al final de cada estudio (4 semanas si se trata de una toxicidad subaguda, 3 meses si se trata de una subcrónica, etc), se discontinúa el tratamiento y se dejan los animales en observación entre 1 semana y 2 o 3 meses. Después de lo cual los animales se sacrifican y se examinan los órganos diana para determinar si se ha producido la regresión de las lesiones en los órganos diana
EL NUMERO DE ANIMALES
El número de animales es importante, en particular al diseñar los estudios a largo plazo y las dosis. Las regulaciones exigen que al final del período de tratamiento (que puede ser de hasta 2 años en los estudios de carcinogénesis) quede un número de animales supervivientes lo suficientemente amplio como para poder hacer comparaciones entre grupos y establecer diferencias que sean estadísticamente significativas. Hay que tener en cuenta que puede haber:
- una mortalidad inducida por el fármaco, sobre todo a las dosis más altas
- una mortalidad espontánea (por ejemplo, algunas cepas de ratón tienen una esperanza de vida que ronda los 2 años, de modo que en un estudio de esta duración un número significativo de animales puede morir en todos los grupos)
- una mortalidad accidental (p. Ejemplo, por una mala intubación si la administración es oral)
Por esta razón, los estudios de carcinogénesis se suelen emplear grupos de 50 machos + 50 hembras/por grupo como mínimo. Si sobreviven todos los animales, al final del estudio hay que llevar a cabo un mínimo 400 autopsias y, si se realizaran estudios hematológicos (15 a 20 parámetros), bioquímicos (20 parámetros), urinarios ( 10-12 parámetros) y anatomopatológicos completos (unos 40 tejidos), habría que hablar de la evaluación de más de 36.000 datos.
Para aliviar esta masa de datos, en particular en los que se refiere a la anatomía patológica que supone procesar los diferentes tejidos y órganos (extraer el órgano, pesarlo, fijarlo en formol, incluirlo en parafina, preparar los cortes, teñirlos y examinarlos), se suelen examinar al completo los animales de control y los tratados con las dosis más altas. Una vez identificados los órganos diana, se procesa estos mismos órganos en los animales tratados con las dosis medias y bajas para determinar si se han producido también lesiones.
LA ESPECIE ANIMAL
Las agencias recomiendan que se utilicen las especies animales cuyo metabolismo sea más parecido al del ser humano. En general, los estudios de toxicidad aguda se llevan a cabo en roedores (rata y ratón), la toxicidad subaguda, subcrónica y crónica en rata y perro (a veces el perro es sustituídos por el mono) y los estudios de carcinogenesis en rata y ratón. Los estudios de fertilidad y toxicidad peri- y post-natal se suelen hacer en rata y la teratogenia en rata y conejo. Los estudios de mutagénesis en hacen con sistemas celulares in vitro (bacterias en el test de Ames, células de mamífero o de linfomas) o in vivo con en el ratón (test del micronúcleo)
LA FARMACOCINETICA Y BIOTRANSFORMACION
La farmacocinética se define como el estudio cuali- y cuantitativo de la absorción distribución, metabolismo y eliminación de un agente en un organismo intacto. Esta información es útil para:
1. predecir el inicio del efecto después de la absorción del fármaco
2. predecir la persistencia de dicho efecto
3. el destino de farmaco y/o de sus metabolitos en los diferentes órganos
4. como se transforma el fármaco en el organismo
5. determinar las vías de eliminación (renal, pulmonar, intestinal)
Antes de iniciar un estudio de toxicidad, es conveniente realizar algún estudio de farmacocinética en un pequeño número de animales con dosis bajas y moderadas para determinar:
- la vía de administración es aceptable (por intubación, con la dieta, por inyección, aplicación sobre la piel, etc). Si el fármaco no se absorbe por vía oral, es inútil hacer estudios de toxicidad por esta vía. - El rango de dosis y qué concentraciones van a producir
- La frecuencia de las dosis La biotransformación es el mecanismo por el cual el organismo transforma las sustancias ingeridas para su eliminación. Esta biotransformación tiene por objeto: - degradar la molécula para originar productos más pequeños - añadir restos que favorezcan su solubilidad y por lo tanto su eliminación La degradación se hace por - oxidación - reducción - hidrólisis La conjugación se hace por - glucuronación - sulfatación - acetilación - glicinación - glutationación
Aunque inicialmente no es necesario conocer el escenario completo de la biofransformación para decidir un estudio de toxicidad, si es conveniente tener una idea general de cual será, en particular para decidir cual puede ser el órgano implicado en la misma y qué enzimas pueden estar implicados. Según la naturaleza de estos, puede producir una toxicidad "local" (por ejemplo hepatoxicidad) que puede aparecer solo a largo plazo y también un aumento de la actividad enzimática (inducción enzimática), generalmente en el citocromo P-450 microsomal hepático, que puede reducir los niveles plasmáticos y por tanto la toxicidad, o una saturación enzimática, que por el contrario, aumente la toxicidad a partir de una ciertas dosis.
ESTUDIOS ALTERNATIVOS
En 1997 el Comité para los productos medicinales (CPMP) definió la regla de las 3R como objeto para reducir el número de animales sacrificados anualmente en los estudios de toxicidad
REDUCCION: evitar duplicaciones de estudios; evitar estudios que han mostrado ser irrelevantes para el hombre por extrapolación; desarrollando estudios complementarios in vitro y ex vivo; aumento la calidad de los tests; obteniendo más información en un menor número de animales
REFINADO: utilizando nuevas tecnologías y definiendo nuevos "end-points" más humanos (por ejemplo, que la muerte no sea un "end-point" en los estudios de toxicidad aguda)
REMPLAZADO · desarrollando métodos alternativos, como cultivos de células humanas. De hecho, en algunos países de la EU, para los productos cosméticos está prohibido el uso de animales de experimentación
Algunas áreas en las que son posibles estos tests alternativos son cultivos de células de varios tipos para determinar los niveles iniciales de toxicidad.
Cuando se observa un órgano diana, pueden hacerse estudios complementarios a los toxicidad crónica en cultivos celulares En estudios de embrio/fetotoxicidad se han descrito estudios in vitro En los estudios de mutagénesis es donde se ha alcanzado mayor difusión. En algunos ensayos determinados (pirógenos vs test de límulos)
REFERENCIAS
WEB-Site de la FDA: http://www.fda.gov/cder/guidance.htm
Documentos de la ICH (International Conference for Harmonization)
1. S1A : The need for Long-term Rodent Carcinogenicity Studies of Pharmaceuticals
2. S1B: Testing for Carcinogenesis of Pharmaceuticals
3. S1C: Dose selection for carcinogenicity Studies of Pharmaceuticals
4. S2A: Specific Aspects of Regulatory Genotoxicity Tests for Pharmaceuticals
5. S2B: Genotoxicity: A Standard Battery for Genotoxicity Testing of Pharmaceuticals
6. S3A: Toxicokinetics: The assessment of Systemic Exposure in Toxicity studies
7. S4A: Duration of Chronic Toxicity Testing in Animals (rodent and nonrodent Toxicity Testing
8. S5A: Detection of Toxicity to Reproduction for Medicinal Products
9. S5B: Detection of Toxicity to Reproduction for Medicinal Products (Addendum)
10. S6: Preclinical safety Evaluation of Biotechnology-derived Pharmaceuticals)
11. M1: NonClinical Safety Studies for the conduct of Human Clinical Trials for Pharmaceuticals
12. ICH-S7: Safety Pharmacology Studies for Human Pharmaceuticals
Otros documentos del WEB-site de la FDA
1. Single-dose Acute Toxicity Testing for Pharmaceuticals
2. Photosafety Testing
WEB-site de la EMEA: http://www.eudra.org/humandocs/humans/ich.htm
1. CPMP/SWP/1042/99: Note for the guidance on Repeated Dose Toxicity.
2. CPMP/SWP/728/95: Replacement of animal studies by in vitro models
Donal J. Ecobichon, Ed. The Basis of Toxicity Testing. 2ª Edición- CRC Press, 1997 ISBN 0-8493-8554-7

APUESTA POR EL CAMBIO

Laboratorios Gobierno EEUU dejarán de usar animales para pruebas
viernes 15 de febrero de 2008 09:29 GYT

Los laboratorios del Gobierno de Estados Unidos dejarán de usar animales en la evaluación de la seguridad de químicos, medicamentos y toxinas para reemplazarlos por modelos celulares y..."

Por Maggie Fox
WASHINGTON (Reuters) - Los laboratorios del Gobierno de Estados Unidos dejarán de usar animales en la evaluación de la seguridad de químicos, medicamentos y toxinas para reemplazarlos por modelos celulares y computarizados, informaron funcionarios.
Los nuevos métodos, que se adoptarán paulatinamente, son más rápidos y serían más precisos y mucho menos costosos, señalaron los Institutos Nacionales de Salud (NIH por su sigla en inglés) y la Agencia de Protección Ambiental (EPA).
El Instituto Nacional de Ciencias de la Salud Ambiental y el Instituto de Investigación del Genoma Humano, ambos parte de los NIH, indicaron que trabajarán con la EPA para asegurarse, antes de expandir el programa, de que los métodos modernos sean precisos.
Las pruebas en animales han sido el eje de la investigación científica durante décadas, pero el director del Instituto de Investigación del Genoma Humano, el doctor Francis Collins, dijo que no predicen muy bien qué es lo que un químico le puede hacer a las personas.
El antiguo procedimiento "es lento y costoso," indicó Collins a periodistas durante una conferencia telefónica. "Nosotros no somos ratas ni tampoco somos como otros primates," añadió.
La iniciativa está comenzando paulatinamente y se realizarán cruces de información entre los sistemas anteriores y los nuevos.
"No se pueden abandonar las pruebas en animales de la noche a la mañana," señaló el director de los NIH, el doctor Elias Zerhouni.
Por su parte, el doctor Samuel Wilson, jefe del Instituto Nacional de Ciencias de la Salud Ambiental, señaló que los laboratorios automatizados pueden usar los métodos sin animales para analizar 100.000 compuestos en hasta 15 concentraciones en dos días.
"Una persona tendría que trabajar ocho horas por día, los siete días de la semana, durante seis meses para hacer eso. Es mucho, mucho más rápido," expresó Wilson.
En un artículo publicado en la revista Science, NIH y EPA informaron que en un año pueden realizarse entre 10 y 100 pruebas usando roedores vivos, como ratas y ratones.
Los exámenes pueden efectuarse más rápido si se emplean otros animales, como peces o moscas de la fruta.
En cambio, utilizando células especializadas o chips de laboratorio, pueden hacerse más de 10.000 pruebas por día.

http://lta.reuters.com/article/topNews/idLTAN1525301420080215?sp=true

UN PRESIDENTE CON VISION DE FUTURO:

"El presidente del Gobierno, José Luis Rodríguez Zapatero, acudirá a León el sábado para inaugurar oficialmente el equipo de resonancia magnética nuclear instalado en la unidad de Cirugía y Radiología de la Facultad de Veterinaria, según ha podido saber este periódico de fuentes oficiales. El modelo de resonancia nuclear de tres teslas es único en Europa y uno de los pocos que existen en el mundo destinado a investigación animal. El equipo, que colocará a León en el primer nivel de excelencia en investigación, está destinado a investigación animal en terapia celular y será utilizada por los especialistas en León del Centro en Red de Medicina Regenerativa y Terapia Celular, en el que participan ochenta investigadores de León, Salamanca y Valladolid. La Junta de Castilla y León y el Instituto Carlos III de investigación investigarán este año dos millones de euros en el Centro en Red de Medicina Regenerativa y Terapia Celular.
Los investigadores de León llevan tres meses utilizando esta tecnología punta para sus estudios con células madre en modelos animales y será el sábado cuando las autoridades autonómicas, provinciales y nacionales apoyen con su presencia la importancia de esta apuesta de los responsables de la Fundación Sanitaria de León, en la que participan distintas instituciones, entre ellas la Universidad y el Hospital de León, con especialistas de hemodinámica y cardiología intervencionista y el departamento de Medicina y Cirugía Animal del Instituto de Biomedicina de la Universidad de León, coordinados por el Felipe Fernández. "

http://www.diariodeleon.es/noticias/noticia.asp?pkid=441806

Pues sí, en el vagón de cola del tren de la modernidad y con las sospecha de que seguramente nos toque la fregona. Paísssssss